如何配置DNS甘油溶液？

您问的“DNS甘油溶液”通常指的是生物化学实验中用于测定还原糖含量的3,5-二硝基水杨酸试剂，其中甘油作为稳定剂和增溶剂，防止试剂结晶析出。

以下是详细的配置方法和注意事项：

**一、配置方法（以1升为例）

**1. 所需试剂与器材

试剂

3,5-二硝基水杨酸 (DNS) 10.0 g

氢氧化钠 (NaOH) 16.0 g （强腐蚀性，小心操作）

酒石酸钾钠 (Rochelle salt) 300.0 g

苯酚（无色结晶酚） 7.5 g （有毒，腐蚀性）

无水亚硫酸钠 (Na₂SO₃) 5.0 g

甘油 100 mL

* 蒸馏水或去离子水

器材

* 1L烧杯或锥形瓶

* 磁力搅拌器和搅拌子（或玻璃棒）

* 容量瓶（1L）或量筒

* 电子天平

* 药匙、称量纸

个人防护 实验服、手套、护目镜，必须在通风橱内操作。

2. 配置步骤（强烈建议在通风橱内进行）

第一步：溶解DNS和碱

1、 用约500 mL的蒸馏水溶解10.0 g DNS。

2、 在搅拌下，缓慢加入16.0 g NaOH（可分次加入，防止剧烈放热和喷溅），此步溶液颜色会变深。

3、 在45-50°C的水浴中加热并搅拌，直至DNS和NaOH完全溶解，溶液变得澄清。

第二步：加入其他成分

1、 向上述溶液中加入300.0 g 酒石酸钾钠，搅拌至完全溶解，酒石酸钾钠是络合剂，能稳定反应。

2、 加入100 mL 甘油，搅拌均匀。甘油的作用是关键：它能有效防止DNS试剂在低温或存放后结晶析出，提高试剂的稳定性。

3、 另取一小烧杯，用约50 mL水溶解7.5 g 苯酚（苯酚熔点低，有时需温水助溶），然后将苯酚溶液加入到主溶液中。

4、 再加入5.0 g 无水亚硫酸钠，搅拌溶解，亚硫酸钠是还原剂，防止试剂被氧化。

第三步：定容与保存

1、 将溶液全部转移至1L容量瓶中，用蒸馏水冲洗烧杯数次，洗涤液一并倒入容量瓶。

2、 最后用蒸馏水定容至1L刻度线，充分混匀。

3、 将配制好的DNS甘油试剂储存于棕色试剂瓶或用铝箔包裹避光的玻璃瓶中。

4、最佳保存条件： 室温（避免阳光直射）或4°C冰箱保存，加入甘油后，低温下也不易结晶，但使用前需恢复至室温并摇匀，一般可稳定保存3-6个月。

**二、注意事项与常见问题

1、安全第一：

* NaOH具有强腐蚀性，配制时务必佩戴手套和护目镜。

* 苯酚有剧毒和腐蚀性，皮肤接触会造成严重烧伤，所有操作必须在通风橱内完成。

* 称量和转移固体DNS时避免吸入粉尘。

2、溶解顺序： 必须先溶解DNS和NaOH，形成稳定的盐溶液后，再加入其他成分，顺序颠倒可能导致溶解困难或试剂失效。

3、甘油的作用： 这是您问题的核心，未加甘油的DNS试剂在低温或长期放置后极易析出黄色结晶，导致浓度改变，加入甘油（5-10%，常用10%）能显著提高溶解度和低温稳定性，是实验室常用的改良方法。

4、颜色与验证：

* 新配制的试剂应为明亮的棕黄色透明溶液。

* 使用前，建议用已知浓度的葡萄糖标准溶液（如1 mg/mL）做一次标准曲线进行验证，以确保试剂活性正常，正常反应后应呈现由黄到红的梯度颜色变化。

5、失效判断： 如果试剂出现大量沉淀、颜色变为深褐色或测定标准样品时显色反应很弱，则可能已失效，需重新配制。

**三、简要测定原理

还原糖（如葡萄糖、麦芽糖）在碱性条件下加热，能将DNS试剂中的硝基还原为氨基，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。颜色深度与还原糖的浓度成正比，通过在540nm波长下测定吸光度，即可计算出样品中还原糖的含量。

：配置DNS甘油溶液的关键是：注意安全防护、遵守溶解顺序、加入适量甘油（10%体积比）以提高稳定性，按照上述步骤操作，您就能配出性能稳定的DNS试剂。

文章摘自：https://idc.huochengrm.cn/dns/23201.html