如何利用DNS试剂准确测定还原糖含量？

DNS试剂测糖的具体步骤与注意事项

糖含量的测定在食品、生物、农业等领域具有重要价值，DNS（3,5-二硝基水杨酸）试剂法是实验室中常用的还原糖定量方法之一，因其操作简便、成本低且结果稳定而被广泛应用，以下是基于实际操作经验的DNS法测糖流程与关键要点。

一、DNS试剂的原理与作用

DNS试剂的核心成分是3,5-二硝基水杨酸，在碱性条件下与还原糖（如葡萄糖、果糖）共热时发生显色反应，生成棕红色氨基化合物，该物质在540nm波长处有最大吸光度，通过比色法即可计算糖含量。

需注意：DNS法仅适用于检测还原糖，若样品含非还原糖（如蔗糖），需先水解处理。

二、标准操作流程

1、样品预处理

- 固体样品需粉碎后溶解于蒸馏水，离心取上清液；液体样品可直接稀释至合适浓度。

- 若含非还原糖，需加入盐酸水解，再用NaOH中和。

2、显色反应

- 取1mL样品液加入2mL DNS试剂，沸水浴加热5分钟。

- 迅速冷却至室温，避免过度氧化影响显色。

3、比色测定

- 用分光光度计在540nm处测定吸光度。

- 以葡萄糖标准溶液绘制标准曲线，计算样品糖含量。

三、常见问题与解决方案

1、显色异常

颜色过浅：可能因加热时间不足或DNS试剂失效，建议现配现用试剂，并确保沸水浴时间精确。

沉淀生成：样品中含蛋白质或淀粉时，需提前用乙醇或酶解法去除干扰物。

2、数据偏差

- 标准曲线需每次实验重新制作，避免试剂批次差异导致误差。

- 样品浓度过高时，吸光度可能超出线性范围，需调整稀释倍数。

四、个人观点：DNS法的优势与局限

DNS法适合快速批量检测，但对操作细节要求严格，显色后需在30分钟内完成测定，否则颜色会逐渐消退，高温加热步骤可能导致部分糖类分解，需严格控制水浴时间，对于高精度要求的实验，建议结合HPLC法交叉验证。

实验室新手常忽视试剂的保存条件——DNS试剂需避光冷藏，若出现结晶或浑浊则需重新配制，只有规范每一步操作，才能确保数据的科学性与可靠性。

文章摘自：https://idc.huochengrm.cn/dns/8715.html